細(xì)胞從培養(yǎng)皿上的解離
以下通用步驟可以在保持細(xì)胞完整性的同時(shí)從培養(yǎng)器皿中分離多
種細(xì)胞系。但這一步驟不能廣泛適用于所有細(xì)胞系。應(yīng)通過實(shí)驗(yàn)
來確定不同體系所需的佳條件和濃度。
?在傳代培養(yǎng)時(shí)監(jiān)測(cè)細(xì)胞存活率。
?細(xì)胞存活率應(yīng)大于90%。
?對(duì)于無血清培養(yǎng)基，建議降低胰酶用量。
1．去除器皿中原有細(xì)胞培養(yǎng)基。
2．用不含鈣鎂的平衡鹽溶液或EDTA清洗細(xì)胞。將清洗溶液加到培　
養(yǎng)瓶中與細(xì)胞相對(duì)的一側(cè)。搖動(dòng)培養(yǎng)瓶1-2分鐘以沖洗細(xì)胞
層，然后倒掉清洗溶液。
3．在培養(yǎng)瓶中與細(xì)胞相對(duì)的一側(cè)以2-3ml/25cm2的比例加入選　
　定的解離溶液（見下表）。確保解離溶液能夠覆蓋整個(gè)細(xì)胞層。　
在37℃下孵育培養(yǎng)瓶。并輕輕搖動(dòng)。通常細(xì)胞在5-15分鐘內(nèi)解
　離。不同細(xì)胞系的解離時(shí)間有所不同。仔細(xì)觀測(cè)解離過程，以免
損傷細(xì)胞。對(duì)于難從基質(zhì)上解離下來的細(xì)胞系，可以輕敲培養(yǎng)
瓶 以加快解離過程。
4．當(dāng)細(xì)胞*解離時(shí)，豎直放置培養(yǎng)瓶使細(xì)胞流向培養(yǎng)瓶底部。
向培養(yǎng)瓶中加入*培養(yǎng)基。反復(fù)吹吸單層表面以分散細(xì)胞。計(jì)
　算細(xì)胞個(gè)數(shù)，然后傳代培養(yǎng)細(xì)胞。
　注意：如果使用無血清培養(yǎng)基，應(yīng)加入大豆胰酶抑制劑。對(duì)于
0.25mg/ml的胰酶抑制劑，一般按1：1（體積比）的比例加入即可
抑制胰酶。